2年生となった坂道たち総北高校自転車競技部のメンバーは、前年度に続きインターハイ出場を決め、まさに今その戦いの最中であった！インターハイ連覇という夢のために必死に練習してきた総北メンバーの前に、王座奪還を狙う箱根学園や、怪物レーサーの御堂筋率いる京都伏見高校など強豪校が立ちはだかる！3日間にわたる過酷なインターハイのなかで、さまざまなトラブルによって徐々に追い詰められていく総北メンバー。果たして彼らは仲間を信じて走り続け、インターハイ連覇という大きな夢を手にすることができるのだろうか？！

「弱虫ペダル GLORY LINE」は、自転車レースアニメの第4期で、舞台はインターハイ1日目の最終局面へと移ります。連覇を目指すチーム総北と強豪たちが繰り広げるレースは、前期以上にヒートアップします。各校がしのぎを削り合う熱いドラマと、登場人物それぞれの見せ場が絶妙に絡み合い、視聴者の目を画面に釘付けにします。各キャラクターの個性と成長、そしてチームとしての絆が試される中で、どの学校が栄光の頂点に立つのか、その結末に注目です。