ある日、妹・みはりに飲まされた怪しい薬によって女の子にされてしまった、元お兄ちゃん・まひろ。ダメニートで引きこもりなまひろは女の子としての生活に大苦戦しつつ、さらには引きこもり脱却を目指すことに。まひろを待ち受けている運命の行方は…？

「お兄ちゃんはおしまい!」は、怪しい薬の影響で女の子になってしまった元お兄ちゃんが主人公。脱・引きこもりを目指し、日々奮闘する姿が描かれています。元兄妹、現姉妹と友人たちとのほのぼのとした日常生活が心温まる作品です。引きこもりからの脱却という目標に向かって、新たな自分を受け入れていく過程がコミカルに展開します。日常系コメディの中にも、家族愛や友情といったテーマが織り交ぜられ、視聴者を引きつけます。